1 目的

      本試驗研究在保育料中添加不同水平的愛(ài)綠舒對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、免疫機能和腸道菌群的影響。

2 材料和方法

2.1 試驗設計

      采用單因子試驗設計，選擇28日齡體重（8.68±0.15）kg長(cháng)大二元雜交斷奶仔豬225頭，設5處理，分為對照組、試驗1組、試驗2組、試驗3組和試驗4組，每個(gè)處理5個(gè)重復，每個(gè)重復9頭，每1欄
為1個(gè)重復。研究愛(ài)綠舒替代抗生素對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響。正式試驗期從2018年5月29日-2018年6月25日，共28天，試驗期從5月23日-5月28日預飼了6天，6月27日對25頭試驗豬進(jìn)行屠宰取樣，
具體試驗設計見(jiàn)表1。

2.2 試驗動(dòng)物的選擇與飼養管理

      試驗地點(diǎn)是在河北漢唐牧業(yè)有限公司，選擇225頭35日齡、體重（8.68±0.15）kg長(cháng)大二元雜交斷奶仔豬，按“體重、胎次、日齡、性別”一致的原則隨機分成5組，每組5個(gè)重復，每個(gè)重復9頭豬，
每1欄為1個(gè)重復。試驗設對照組、試驗1組、試驗2組、試驗3組和試驗4組，試驗期內各組豬分別采食相應日糧，試驗期30天。

      試驗豬采用圈養的方式，自由采食，自由飲水，室內溫度控制在20-25℃，濕度80%-85%；每天定時(shí)飼喂(8:00、12:00、16:00和20:00)，每次飼喂以飼槽中略有余料為宜；其它飼養管理按照豬場(chǎng)常
規進(jìn)行。

2.3 試驗日糧

      參照NRC1998乳豬（7-15kg）的營(yíng)養需要進(jìn)行配制，試驗飼糧為粉料，愛(ài)綠舒（通用型）由北京愛(ài)綠生物科技有限公司提供。

2.4 測定指標

2.4.1 生產(chǎn)性能

      平均日增重（ADG）：分別于試驗第1日齡和第28天早晨空腹稱(chēng)重，計算各生長(cháng)階段的ADG；

      平均日采食量（ADFI）：每天以重復為單位記錄日采食量，然后于第14天和第28天以重復為單位計算耗料量，并計算每個(gè)重復的ADFI；

      料重比（F/G）：根據增重和采食量計算F/G。

2.4.2 仔豬腹瀉頻率和腹瀉指數的評定

      每天早上9:00和下午3:00以重復為單位觀(guān)察記錄每頭豬腹瀉的情況，觀(guān)察糞便性狀，以最高分作為當天的腹瀉指數，腹瀉頻率=腹瀉次數/(豬總頭×2)×100%，腹瀉指數=腹瀉評定總分數/（豬總頭×3
×2）×100%。

2.4.3 仔豬皮毛指數

      在試驗1天、第14天和第28天分別對乳豬的外觀(guān)進(jìn)行評分。皮毛得分=皮膚紅潤程度+毛色亮度+毛順程度，具體評定方法見(jiàn)表3。

2.4.4 死亡率、成活率

      試驗期間每天記錄死亡豬體重，并記錄每欄豬數量。

      死亡率（%）=死亡豬/總豬頭數×100；

      成活率（%）=100%-死亡率。

2.4.5免疫機能測定

（1）免疫器官發(fā)育指數（胸腺、脾臟、淋巴結）:免疫器官發(fā)育指數=（免疫器官重量/豬體重）×100%；

（2）血液生理生化指標：總蛋白、白蛋白、C3、C4、IgA、IgG和IgM、IL-2、IL-4、干擾素-γ（IFN-γ）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）；

（3）免疫器官中CD4+、CD8+細胞檢測：Elisa試劑盒檢測。

2.4.6腸道形態(tài)結構測定

取十二指腸、空腸、回腸腸斷進(jìn)行固定，將固定的樣品經(jīng)沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋等處理后切片，進(jìn)行蘇木精－伊紅染色，顯微照相，測量絨毛長(cháng)度及隱窩深度，計算絨毛長(cháng)度與隱窩深度的
比值，并計算絨毛高度與隱窩深度的比值（VH/CD，VCR），各指標取平均數作為測定數據。

2.4.7常規營(yíng)養成分及消化率測定

采用內源指示劑（4N鹽酸不溶灰分）方法測定能量、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、鈣的表觀(guān)消化吸收率。表觀(guān)消化率計算采用內源指示劑法，計算公式如下：

某養分消化率（%）=100-100*（b*c）/（a*d）。其中：

a：飼料中某養分含量； b：糞樣中某養分含量；

c：飼料中酸不溶灰分含量；d：糞樣中酸不溶灰分含量。

2.5 統計分析

      結果用平均數±標準差表示，數據統計分析采用SPSS17.0統計軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），采用Duncan’S檢驗進(jìn)行多重比較。

3 結果

      將各處理組斷奶仔豬腸道（空腸）微生物樣品進(jìn)行測序，并統計各樣本的α多樣性指數后得到各樣本 OTU 數目分別為276（對照組）、262（試驗Ⅰ組）、266（試驗Ⅱ組）、302（試驗Ⅲ組）、289（試驗Ⅳ組）。Chao1 指數、ACE 指數和Shannon指數 、Simpson 指數表示微生物群落結構的變化狀況。其中，Chao1 指數和ACE 指數越高，表明群落豐富度越高，Shannon指數越高，表明群落物種的多樣性越高。

      由上表所示，與對照組和試驗Ⅳ組相比，試驗Ⅲ組中ACE 指數增加，且顯著(zhù)高于試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組；Chao1指數高于對照組、試驗Ⅰ和Ⅱ組，結果表明，斷奶仔豬日糧中添加500g/T的愛(ài)綠舒能夠增加空腸微生物菌群的豐富度。與對照組和其他處理組相比，試驗Ⅲ組中Shannon指數均高于對照組和其他處理組，結果表明，斷奶仔豬日糧中添加500g/T的愛(ài)綠舒能夠增加空腸微生物菌群的多樣性。

      綜上，我們發(fā)現，日糧中添加500g/T愛(ài)綠舒能夠提高斷奶仔豬空腸微生物菌群的豐富度和多樣性，從而影響腸道微生物菌群的組成。

（河北農業(yè)大學(xué)）