1 試驗目的

植物提取物類(lèi)產(chǎn)品多數通過(guò)提高腸道免疫功能、黏膜修復以及抑制球蟲(chóng)發(fā)育等而起到一定的抗球蟲(chóng)作用。艾美耳球蟲(chóng)對雞腸道破壞嚴重，嚴重混合感染時(shí)病變可擴展到腸道大部分范圍，不但會(huì )影響雞
生長(cháng)發(fā)育，還會(huì )影響到養雞業(yè)生產(chǎn)經(jīng)濟效益。本試驗主要通過(guò)動(dòng)物試驗并觀(guān)察各項指標，分析植物抗球蟲(chóng)劑愛(ài)綠爽與雞球蟲(chóng)四價(jià)疫苗在黃雞上聯(lián)合使用的協(xié)同作用，從而為生產(chǎn)上雞球蟲(chóng)病的科學(xué)防控提供
依據。

2 材料與方法

2.1 材料

供試藥物：愛(ài)綠爽（Ⅰ型）、甲基鹽霉素。

供試雞：黃雞雞苗在無(wú)球蟲(chóng)環(huán)境下飼養，飲用潔凈自來(lái)水，在1日齡分組、稱(chēng)重，根據分組情況分別飼喂含有愛(ài)綠爽、甲基鹽霉素以及不含抗球蟲(chóng)藥的全價(jià)粉料。

供試飼料：基礎日糧為按黃羽肉雞標準生產(chǎn)的不含抗球蟲(chóng)藥的全價(jià)粉料。

供試強毒卵囊：四種艾美耳球蟲(chóng)（柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲(chóng)）強毒卵囊，由佛山市正典生物技術(shù)有限公司分離、鑒定和擴繁。

供試球蟲(chóng)疫苗：佛山市正典生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的四價(jià)苗（含柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲(chóng)）。

試驗時(shí)間：2019.09.10～10.29，共計50天。

2.2 方法

2.2.1 分組與免疫

將1日齡試驗黃羽肉雞隨機分成15組，每組為100只（3個(gè)重復組），按表1處理，地面平養，養至5日齡，免疫組接種球蟲(chóng)四價(jià)疫苗1羽份/雞，具體如表1所示。于免疫后3周（26日齡）每組各取20只雞
稱(chēng)重、籠養并進(jìn)行攻蟲(chóng)試驗（其中不處理對照組每組取40只雞，分為不攻蟲(chóng)的陰性對照組20只和攻蟲(chóng)的陽(yáng)性對照組20只）。

2.2.2 觀(guān)察指標

（1）球蟲(chóng)卵囊數監測：

分別于12日齡、19日齡、26日齡、33日齡攻毒前每組收集4堆小腸糞和1堆盲腸糞進(jìn)行卵囊監測（判斷免疫后卵囊排出量是否正常，愛(ài)綠爽對免疫過(guò)程中卵囊排出量的影響）。

（2）存活率、增重和料肉比：

①存活率：

存活率（%）＝存活雞數÷開(kāi)始雞數×100%

②增重情況：

對于黃羽肉雞試驗，分別于1日齡、21日齡、51日齡等階段進(jìn)行分組稱(chēng)重（包括料重和雞重），計算各階段和全過(guò)程的平均增重、相對增重和料肉比。

1)平均增重=（最后存活的雞只數的總重/存活的雞只數）-（開(kāi)始的雞只的總重/開(kāi)始時(shí)的雞只數）

2)相對增重率=（用藥組或感染不用藥組的平均增重/不感染不用藥組的平均增重）×100%

3)料肉比= 消耗飼料總量（kg）／增重總量（kg）

（3）通過(guò)攻蟲(chóng)試驗觀(guān)察抗球蟲(chóng)效果的指標

26日齡時(shí)每組抽取20只，除第1、2、3組外，黃羽肉雞試驗其他各組（包括陽(yáng)性對照組）每雞經(jīng)口感染柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲(chóng)強毒孢子化卵囊各6萬(wàn)、6萬(wàn)、6萬(wàn)、5萬(wàn)共23萬(wàn)。指標如下：

①存活率：

存活率（%）＝存活雞數÷開(kāi)始雞數×100%

②卵囊計數：

分別收集各組試驗雞感染后足144～168 h的糞便，用麥氏計數板法計每克糞便卵囊數，檢測各糞便中的卵囊含量，計算卵囊產(chǎn)量和卵囊值。

卵囊值：當陰性組或用藥組 OPG 值與陽(yáng)性組 OPG 值的比值分別為小于 1%、1%～25%、25%～50%、50%～75%和 75%～100%時(shí)，卵囊值分別為 0，5，10，20 和 40。

③病變計分：

攻蟲(chóng)后5天每組隨機宰殺5只雞，逐羽觀(guān)察小腸和盲腸病變，將腸道病變分為0～+4五個(gè)等級。

④根據相對卵囊產(chǎn)量（ROP）、病變記分減少率（RLS）評價(jià)耐藥性和抗球蟲(chóng)效果：

a.相對卵囊產(chǎn)量（ROP）=（感染用藥組卵囊產(chǎn)量/感染不用藥組卵囊產(chǎn)量）×100%；

ROP<15%，判為耐藥陰性；ROP≥15%，判為耐藥陽(yáng)性。

b.病變記分減少率（RLS）；

RLS =（感染不用藥組平均病變記分－感染用藥組平均病變記分）/ （感染不用藥組平均病變記分）×100%；

RLS<50%，判為耐藥陽(yáng)性；RLS≥50%，判為耐藥陰性。其中RLS值小于等于30%，判為完全耐藥；RLS值在31～50%之間，判為部分耐藥。

3 試驗結果

3.1 地養雞觀(guān)察指標

3.1.1 地養雞球蟲(chóng)卵囊數監測

從表2和圖1所示，不處理對照組卵囊數量隨日齡增長(cháng)，表明外界存在野毒蟲(chóng)株；26日齡前愛(ài)綠爽不免疫組和化藥對照組卵囊數均低于不處理對照組，表明愛(ài)綠爽和化藥甲基鹽霉素對球蟲(chóng)感染有抑制作
用；26日齡后隨著(zhù)球蟲(chóng)感染數量的增加，抑制作用減弱。

免疫對照組在監測期間卵囊排量一直處于上升趨勢，可能受外界球蟲(chóng)的侵襲和堆型艾美耳球蟲(chóng)強繁殖力影響，堆型艾美耳球蟲(chóng)免疫力的建立延后。

愛(ài)綠爽免疫組在免疫后3周到達排卵高峰后平穩下降，表明愛(ài)綠爽免疫組黃羽肉雞已建立良好的免疫保護力。免疫后7日齡后，在外界球蟲(chóng)的侵襲下，愛(ài)綠爽免疫組卵囊數一直低于免疫對照組，表明愛(ài)
綠爽對球蟲(chóng)的感染具有抑制作用，同時(shí)不影響球蟲(chóng)免疫力的建立，體現愛(ài)綠爽與疫苗聯(lián)合使用具有一定的優(yōu)勢，在臨床上能減少疫苗反應，在野毒存在條件下也能建立良好的免疫力。

3.1.2 地養雞存活率、相對增重率和料肉比：

表3所示,地養黃羽肉雞的存活率依次為愛(ài)綠爽不免疫組=化藥對照組＞免疫對照組＞愛(ài)綠爽免疫組＞不處理對照組。不處理對照組存活率為94.3%，可能受外界球蟲(chóng)感染影響，所有試驗組存活率均高
于不處理對照組。1-20日齡相對增重率方面由高到低為愛(ài)綠爽不免疫組＞愛(ài)綠爽免疫組＞免疫對照組＞化藥對照組。21-50日齡以及1-50日齡相對增重率由高到低為化藥對照組＞愛(ài)綠爽免疫組＞愛(ài)綠爽
不免疫組＞免疫對照組，從數據穩定性方面看愛(ài)綠爽免疫組表現更為穩定。

表4數據顯示,地養雞1-20日齡料肉比并無(wú)差異；21-50日齡料肉比由低到高為愛(ài)綠爽免疫組=化藥對照組＜愛(ài)綠爽不免疫組＜免疫對照組=不處理對照組，這說(shuō)明愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合使用提高了料肉比。

3.2 免疫后攻蟲(chóng)試驗觀(guān)察抗球蟲(chóng)效果指標

免疫后試驗雞轉籠養并經(jīng)口感染柔嫩、毒害、巨型、堆型艾美耳球蟲(chóng)強毒混合孢子化卵囊23萬(wàn)檢驗免疫保護效果，指標檢測如下：

3.2.1 病變計分

表5顯示，愛(ài)綠爽免疫組在腸道各部位的病變計分均低于免疫對照組和愛(ài)綠爽不免疫組，表明愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合使用即建立良好的免疫力，也減輕了球蟲(chóng)免疫產(chǎn)生的病變。

3.2.2 存活率、相對卵囊產(chǎn)量（ROP）、病變記分減少率（RLS）。

表6所示，存活率各試驗組均高于陽(yáng)性對照組；相對卵囊產(chǎn)量由低到高依次為愛(ài)綠爽免疫組＜免疫對照組＜化藥對照組＜愛(ài)綠爽不免疫組。愛(ài)綠爽免疫組的卵囊產(chǎn)量最低。這說(shuō)明愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合
使用建立了良好的免疫力，從而起到了良好的抗球蟲(chóng)效果。

病變減少率方面由低到高依次為化藥對照組＜愛(ài)綠爽不免疫組＜免疫對照組＜愛(ài)綠爽免疫組，由此可見(jiàn)愛(ài)綠爽和疫苗聯(lián)合使用可以大大減少雞球蟲(chóng)疫苗反應及野毒蟲(chóng)株感染對腸道造成的損傷。

華南農業(yè)大學(xué)寄生蟲(chóng)教研室

項目人員：姜亞杰、張杭、蔡曉懿、陳曉丹、陸肖、范雪梅、馮詩(shī)喻、陳思彤

簽審人：翁亞彪教授、林瑞慶研究員

時(shí)間：2019-12